Норма потребления: Рациональные нормы потребления пищевых продуктов

Жилищным кодексом РФ полномочиями по установлению нормативов потребления коммунальных услуг для граждан наделены субъекты Российской Федерации, в Самарской области регулирующим органом является Министерство энергетики и жилищно- коммунального хозяйства.

В настоящее время в городском округе Самара действуют следующие нормативы потребления коммунальных услуг:

1. 2.1.Нормативы потребления тепловой энергии и горячего водоснабжения для граждан городского округа Самара

До 01.07.2019 года действовали нормативы потребления тепловой энергии и горячего водоснабжения  в размере, установленном приложением N4 к постановлению Главы городского округа Самара от 18.12.2007 N1153 «Об оплате гражданами жилых помещений, коммунальных услуг в городском округе Самара» (Нормативы по отоплению из расчета оплаты гражданами потребленной тепловой энергии равными долям в течение календарного года (12 месяцев).

		Единица измерения	Норма расхода в месяц
Норматив потребления тепловой энергии на отопление жилых помещений	Для всех видов жилых помещений, за исключением коммунальных квартир и отдельных комнат в общежитиях	Гкал. на 1 кв. метробщей площади	0,018 <*>
	Для коммунальных квартир и отдельных комнат в общежитиях	Гкал. на 1 кв. метр жилой площади	0,025 <*>
Норматив потребления тепловой энергии на горячее водоснабжение		Гкал. на 1 человека Гкал. на 1 куб.метр воды	0,22 <*>0,0611<**>
Норматив потребления химически очищенной воды для горячего водоснабжения		Куб.м. воды на 1 человека	3,6 <*>

<*> Применяется для расчета оплаты горячего водоснабжения и отопления в жилых помещениях, не оборудованных приборами учета.
<**> Применяется для расчета оплаты горячего водоснабжения в жилых помещениях, оборудованных приборами учета.

С 1 июля 2019 года вступили в силу новые нормативы потребления коммунальной услуги по отоплению, а также нормативы потребления коммунальной услуги по отоплению при использовании надворных построек, расположенных на земельном участке, установленные приказом министерства энергетики жилищно-коммунального хозяйства Самарской области от 20. 06.2016 № 131.

НОРМАТИВЫ ПОТРЕБЛЕНИЯ КОММУНАЛЬНОЙ УСЛУГИ ПО ОТОПЛЕНИЮ

<*> Информация о величине нормативов потребления коммунальной услуги по отоплению на 12 месяцев предоставляется справочно. Нормативы потребления коммунальной услуги по отоплению на 12 месяцев определены с применением коэффициента периодичности внесения потребителями платы за коммунальную услугу по отоплению, равного 7/12.

Примечание.
Министерству социально-демографической и семейной политики Самарской области для предоставления гражданам компенсации за коммунальную услугу по отоплению в целях социальной защиты населения, оплачивающего услуги по отоплению (по показаниям общедомового прибора учета в отопительный период), применять нормативы потребления коммунальной услуги по отоплению, установленные на 7 месяцев.

НОРМАТИВЫ ПОТРЕБЛЕНИЯ
КОММУНАЛЬНОЙ УСЛУГИ ПО ОТОПЛЕНИЮ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ НАДВОРНЫХ
ПОСТРОЕК, РАСПОЛОЖЕННЫХ НА ЗЕМЕЛЬНОМ УЧАСТКЕ

Направление использования коммунального ресурса	Единица измерения	Норматив потребления
		На 12 месяцев <*>	На 7 месяцев
Отопление на кв. метр надворных построек, расположенных на земельном участке	Гкал на кв. метр в месяц	0,0173	0,0297 расчетный метод

<*> Информация о величине нормативов потребления коммунальной услуги по отоплению на 12 месяцев предоставляется справочно. Нормативы потребления коммунальной услуги по отоплению на 12 месяцев определены с применением коэффициента периодичности внесения потребителями платы за коммунальную услугу по отоплению, равного 7/12.

С 1 июля 2019 года вступили в силу нормативы расхода тепловой энергии, используемой на подогрев холодной воды для предоставления коммунальной услуги по горячему водоснабжению в жилых помещениях, установленные приказом министерства энергетики и жилищно-коммунального хозяйства Самарской области от 16.05.2017 № 119.

НОРМАТИВЫ
РАСХОДА ТЕПЛОВОЙ ЭНЕРГИИ, ИСПОЛЬЗУЕМОЙ НА ПОДОГРЕВ ХОЛОДНОЙ
ВОДЫ ДЛЯ ПРЕДОСТАВЛЕНИЯ КОММУНАЛЬНОЙ УСЛУГИ ПО ГОРЯЧЕМУ
ВОДОСНАБЖЕНИЮ В ЖИЛЫХ ПОМЕЩЕНИЯХ (ГКАЛ НА 1 КУБ. М) <1>, <2>

Примечание:
<1> Средняя температура холодной воды в сети водопровода принята в размере 9,05 °С.
<2> При расчете расхода тепловой энергии, используемой на подогрев холодной воды, для предоставления коммунальной услуги по горячему водоснабжению в жилых помещениях, использовался расчетный метод.
<3> В том числе в случае производства коммунальной услуги по горячему водоснабжению с использованием внутридомовых инженерных систем, включающих оборудование, входящее в состав общего имущества собственников помещений в многоквартирном доме.

1.2.2. Нормативы потребления холодного водоснабжения и водоотведения для граждан городского округа Самара, проживающего в жилых помещениях, не оборудованных приборами учета

До 01.07.2019 года действовали нормативы потребления холодного водоснабжения и водоотведения  в размере, установленном приложением N5 к постановлению Главы городского округа Самара от 18.12.2007 N1153 «Об оплате гражданами жилых помещений, коммунальных услуг в городском округе Самара»:

С 1 июля 2019 года вступили в силу новые нормативы потребления коммунальных услуг по холодному водоснабжению, горячему водоснабжению и водоотведению в жилых помещениях, утвержденные приказом министерства энергетики и жилищно-коммунального хозяйства Самарской области от 26.11.2015 № 447.

НОРМАТИВЫ
ПОТРЕБЛЕНИЯ КОММУНАЛЬНЫХ УСЛУГ ПО ХОЛОДНОМУ ВОДОСНАБЖЕНИЮ,
ГОРЯЧЕМУ ВОДОСНАБЖЕНИЮ И ВОДООТВЕДЕНИЮ В ЖИЛЫХ ПОМЕЩЕНИЯХ

Примечания:
1. Норматив потребления коммунальной услуги по водоотведению равен сумме норматива по холодному водоснабжению и норматива по горячему водоснабжению.
2. Нормативы потребления коммунальных услуг по категориям 16 и 16(1) применяются также для многоквартирных домов, переведенных из категории общежитий, в которых сохранилась проектная степень благоустройства и оснащенность водоразборными устройствами.

1.2.3. Нормативы потребления коммунальных услуг по холодному водоснабжению при использовании земельного участка и надворных построек вводятся в действие с 01.01.2017 года.

Примечание:

В расчете нормативов принят период использования холодной воды для водоснабжения:

– полив земельного участка – с 1 мая по 31 августа;
– бани (сауны) – круглый год;
– открытых (крытых) летних бассейнов различных типов и конструкций – с 1 июня по 31 августа;
– закрытого бассейна, расположенного в жилом доме (части жилого дома), и примыкающих к нему и (или) отдельно стоящих на общем с жилым домом (частью жилого дома) земельном участке надворных построек – круглый год;
– полив теплиц, парников (зимних садов) круглогодичного использования площадью более 10 кв. метров – круглый год;
– полив теплиц, парников, используемых в теплый период года, площадью более 10 кв. метров – с 1 мая по 31 августа.

1.2.4. Нормативы потребления холодной (горячей) воды, отведения сточных вод в целях содержания общего имущества в многоквартирном доме 

В соответствии с Жилищным кодексом РФ, постановлением Правительства РФ от 06.05.2011 №354 «О предоставлении коммунальных услуг собственникам и пользователям жилых помещений в многоквартирных домах и жилых домов», постановлением Правительства РФ от 23.05.2003 №306 «Об утверждении Правил установления и определения нормативов потребления коммунальных услуг и нормативов потребления коммунальных ресурсов в целях содержания общего имущества в многоквартирном доме», постановлением Правительства РФ от 26.12.2016 №1498 “О вопросах предоставления коммунальных услуг и содержания общего имущества в многоквартирном доме” Приказом министерства энергетики и ЖКХ Самарской области от 16.05.2017 №121 утверждены нормативы потребления холодной (горячей) воды, отведения сточных вод в целях содержания общего имущества в многоквартирном доме.

Норматив отведения сточных вод в целях содержания общего имущества в многоквартирном доме равен сумме норматива потребления холодной воды и норматива потребления горячей воды.

Нормативы потребления холодной (горячей) воды в целях содержания общего имущества в многоквартирном доме

Примечание:

1. Тип А – система горячего водоснабжения с изолированными стояками;   тип  Б  –  система  горячего  водоснабжения  с неизолированными стояками.

2. Нормативы  потребления  холодной  (горячей)  воды  по категории    2   применяются    в   случаях   производства коммунальной     услуги    по    горячему  водоснабжению с     использованием внутридомовых инженерных систем, включающих оборудование,   входящее   в   состав   общего   имущества собственников    помещений    в    многоквартирном    доме                 (при наличии такого оборудования).

3. Нормативы   потребления  холодной  (горячей)  воды  по  категории 6 применяются также для  многоквартирных  домов, переведенных из категории общежитий, в которых сохранилась проектная    степень    благоустройства   и   оснащенность    водоразборными устройствами.

1.2.4. Нормы потребления газа населением при отсутствии приборов учета газа

Нормативы потребления сетевого газа населением г.о. Самара установлены с 01.09.2012 Приказом Министерства энергетики и жилищно-коммунального хозяйства Самарской области от 16.08.2012 N195 «Об утверждении норм и нормативов потребления природного газа населением при отсутствии приборов учета газа»

1.2.5. Нормативы потребления коммунальной услуги по электроснабжению

В соответствии с Жилищным кодексом Российской Федерации, постановлением Правительства Российской Федерации от 06.05.2011 N 354 “О предоставлении коммунальных услуг собственникам и пользователям помещений в многоквартирных домах и жилых домов”, постановлением Правительства Российской Федерации от 23.05.2006 N 306 “Об утверждении Правил установления и определения нормативов потребления коммунальных услуг” Приказом министерства энергетики и жилищно-коммунального хозяйства Самарской области от 30.06.2016 № 139 установлены:
– нормативы потребления коммунальной услуги по электроснабжению в жилых помещениях многоквартирных домов и жилых домах, в том числе общежитиях квартирного типа, населением Самарской области;
– нормативы потребления коммунальной услуги по электроснабжению населением Самарской области в жилых помещениях в многоквартирных домах, включающих общежития квартирного типа, общежития коридорного, гостиничного и секционного типов;
– нормативы потребления коммунальных ресурсов по электроснабжению в целях содержания общего имущества в многоквартирном доме;
– нормативы потребления коммунальной услуги по электроснабжению при использовании надворных построек, расположенных на земельном участке на территории Самарской области.

Указанный приказ вступил в силу с 01.10.2016.

НОРМАТИВЫ ПОТРЕБЛЕНИЯ КОММУНАЛЬНОЙ УСЛУГИ ПО ЭЛЕКТРОСНАБЖЕНИЮ В ЖИЛЫХ ПОМЕЩЕНИЯХ МНОГОКВАРТИРНЫХ ДОМОВ И ЖИЛЫХ ДОМАХ, В ТОМ ЧИСЛЕ ОБЩЕЖИТИЯХ КВАРТИРНОГО ТИПА НАСЕЛЕНИЕМ САМАРСКОЙ ОБЛАСТИ

НОРМАТИВЫ ПОТРЕБЛЕНИЯ КОММУНАЛЬНОЙ УСЛУГИ ПО ЭЛЕКТРОСНАБЖЕНИЮ В ЖИЛЫХ ПОМЕЩЕНИЯХ В МНОГОКВАРТИРНЫХ ДОМАХ, ВКЛЮЧАЮЩИХ ОБЩЕЖИТИЯ КВАРТИРНОГО ТИПА, ОБЩЕЖИТИЯ КОРИДОРНОГО, ГОСТИНИЧНОГО И СЕКЦИОННОГО ТИПОВ

НОРМАТИВЫ ПОТРЕБЛЕНИЯ КОММУНАЛЬНЫХ РЕСУРСОВ ПО ЭЛЕКТРОСНАБЖЕНИЮ В ЦЕЛЯХ СОДЕРЖАНИЯ ОБЩЕГО ИМУЩЕСТВА В МНОГОКВАРТИРНОМ ДОМЕ

——————————–

НОРМАТИВЫ ПОТРЕБЛЕНИЯ КОММУНАЛЬНОЙ УСЛУГИ ПО ЭЛЕКТРОСНАБЖЕНИЮ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ НАДВОРНЫХ ПОСТРОЕК, РАСПОЛОЖЕННЫХ НА ЗЕМЕЛЬНОМ УЧАСТКЕ НА ТЕРРИТОРИИ САМАРСКОЙ ОБЛАСТИ

1.2.6 Норматив накопления твердых коммунальных отходов (ТКО)

Приказом Министерства энергетики и жилищно-коммунального хозяйства Самарской области от 29.12.2018 года №1023  «Об утверждении и применении нормативов накопления твердых коммунальных отходов на территории городских округов Самарской области на 1 кв.м. общей площади жилого помещения» для городского округа Самара утвержден   норматив накопления твердых коммунальных отходов на территории городского округа Самара на 1 кв.м. общей площади жилого помещения  многоквартирных и индивидуальных домов в  размере 0,091 куб.м./ кв.м в год.

Нормативы потребления при отсутствии приборов учёта

Нормативы потребления коммунальной услуги по электроснабжению при отсутствии приборов учёта на общедомовые нужды

Нормативы потребления электроэнергии

Нормативы потребления используются для расчета платы за коммунальные услуги в тех случаях, если собственником не передаются показания прибора учета, то есть выяснить фактический расход услуги невозможно. Если показания не передаются в связи с  поломкой прибора учета, то первые три месяца плату за электроэнергию ему будут начислять по среднемесячному расходу, а с четвертого – уже по нормативам. Если счетчик имеется, но собственник по каким-либо причинам не передает показания, то  нормативы начинают применять с четвертого месяца. До этого момента расчет ведется также исходя из среднемесячного потребления.

Напоминаем, что если у жителя многоквартирного дома имеется техническая возможность для установки прибора учета, но при этом счетчик отсутствует, то при начислении платы за электроэнергию к нормативам  применяется повышающий коэффициент 1,4. С 1 января 2017 года  повышающий коэффициент увеличится до 1,5.

Нормативы потребления электроэнергии утверждены «Постановлением Правительства Красноярского края от 11.10.2016 № 518-п «Об утверждении нормативов потребления коммунальной услуги по электроснабжению на территории Красноярского края», с изменениями и дополнениями от 03.08.2017 ПП Красноярского края № 450-п Постановление вступает в силу с 01.09.2017.

Постановление Правительства Красноярского края от 17 мая 2017 г. N 271-П
«Об утверждении нормативов потребления коммунальных ресурсов в целях содержания общего имущества в многоквартирном доме на территории Красноярского края и о внесении изменений в некоторые постановления Правительства Красноярского края, устанавливающие нормативы потребления коммунальных услуг на территории Красноярского края»

Нормативы потребления электрической энергии в целях содержания общего имущества в многоквартирном доме на территории Красноярского края, определенные расчетным методом

Нормативы потребления коммунальной услуги по электроснабжению при использовании земельного участка и надворных построек в целях содержания сельскохозяйственных животных на территории Красноярского края, определенные расчетным методом

Наверх

Таблица тарифов — «ТНС энерго Ростов-на-Дону»

1

Исполнители коммунальных услуг (товарищества собственников жилья, жилищно-строительные, жилищные или иные специализированные потребительские кооперативы либо управляющие организации), приобретающие электрическую энергию (мощность) для предоставления коммунальных услуг собственникам и пользователям жилых помещений и содержания общего имущества многоквартирных домов;

Наймодатели (или уполномоченные ими лица), предоставляющие гражданам жилые помещения специализированного жилищного фонда включая жилые помещения в общежитиях, жилые помещения маневренного фонда жилые помещения в домах системы социального обслуживания населения, жилые помещения фонда для временного поселения вынужденных переселенцев, жилые помещения фонда для временного проживания лиц, признанных беженцами, а также жилые помещения для социальной защиты отдельных категорий граждан, приобретающие электрическую энергию (мощность) для предоставления коммунальных услуг пользователям таких жилых помещений в объемах потребления электрической энергии населением и содержания мест общего пользования в домах, в которых имеются жилые помещения специализированного жилого фонда;

Юридические и физические лица приобретающие электрическую энергию (мощность) в целях потребления на коммуначьно-бытовые нужды в населенных пунктах и жилых зонах при воинских частях и рассчитывающиеся по договору энергоснабжения по показаниям общего прибора учета электрической энергии.

Гарантирующие поставщики, энергосбытовые, энергоснабжающие организации, приобретающие электрическую энергию (мощность) в целях дальнейшей продажи населению и приравненным к нему категориям потребителей, указанным в данном пункте.

Закрыть

Норма потребления

Норма потребления ($ / кВтч) может использоваться для расчета счета по-разному, в зависимости от того, есть ли избыточное производство солнечной энергии и разрешена ли продажа в сеть. Многие коммунальные предприятия разработали сложные конструкции счетчиков, чтобы отслеживать покупки из сети и продажи в сеть. Льготные тарифы, Чистый учет, Покупка всего и продажи — все это разные типы норм потребления и имеют разные определения во всем мире.Чтобы не усложнять задачу, мы используем следующие пять типов транзакций по ставке, чтобы определить, как норма потребления используется для расчета счета. Тариф может иметь несколько уровней потребления, и каждый уровень потребления может иметь только один тип транзакции. Вот список возможных типов транзакций по ставкам:

Эти типы транзакций более подробно описаны ниже:

Общие сведения о чистом счетчике, чистом избытке и чистой покупке:

На схеме ниже показана транзакция между солнечной панелью, домом (клиентом) и коммунальным предприятием с использованием одного счетчика.

В доме есть только один метр, который может «двигаться вперед» при покупке электроэнергии из сети и «двигаться назад» при продаже излишка в сеть.

За первый час в январе нагрузка составила 10 кВт, а солнечная панель произвела 20 кВт. В этот час нагрузка после собственного потребления составляет -10 кВт. Поскольку это отрицательная нагрузка, мы могли бы экспортировать энергию в сеть. Таким образом, в первый час января система продала в Сеть 10 кВт. После первого часа января счетчик А «сдвинулся назад» и составил -10.

В следующий час нагрузка после собственного потребления составляет 10 кВт, что означает, что системе необходимо приобрести 10 кВт из сети. Теперь счетчик переместится на десять вперед и покажет ноль (-10 + 10 = 0). Это продолжается до конца месяца, когда коммунальное предприятие снимает показания счетчика.

В счетчиках этого типа на счет за коммунальные услуги влияет только ежемесячное «чистое» показание, а не мгновенные показания счетчика. Если общее количество покупок в конце месяца было больше, чем общее количество продаж, то счетчик будет иметь положительное значение.Если общий объем продаж на конец месяца больше, чем общий объем покупок, то счетчик будет иметь отрицательное значение.

Для представления счетчиков, которые регистрируют «чистое» потребление за период времени, мы используем следующие три типа транзакций по ставке:

(1) Net Meter

Норма потребления с «NetMeter» будет рассчитана как = кВтч нетто * $ / кВтч.

В приведенном выше примере количество нетто-кВтч было рассчитано за месяц. У некоторых коммунальных услуг будут разные периоды начисления платы.Варианты периода начисления для тарифов NetMeter: Почасовая, Ежедневная, Ежемесячная и Ежегодная.

(2) Чистая покупка

Норма потребления с «NetPurchase» будет рассчитана ТОЛЬКО, ЕСЛИ нетто кВтч> 0. Стоимость = кВтч нетто * $ / кВтч.

В приведенном выше примере количество нетто-кВтч было рассчитано за месяц. У некоторых коммунальных услуг будут разные периоды начисления платы. Варианты периода начисления для ставок «NetPurchase»: Почасовая и Ежемесячная.

(3) Net Excess

Норма потребления с «NetExcess» будет рассчитана ТОЛЬКО ЕСЛИ нетто кВтч <0.Стоимость = кВтч нетто * $ / кВтч

В приведенном выше примере количество нетто-кВтч было рассчитано за месяц. У некоторых коммунальных услуг будут разные периоды начисления платы. Варианты оплаты ставок «NetExcess»: Почасовая и Ежемесячная.

Общие сведения об импорте и экспорте

На приведенной ниже диаграмме показаны потоки энергии между солнечной батареей, домом (клиентом) и коммунальным предприятием.

В системе два счетчика, каждый из которых может только «двигаться вперед».Счетчик A регистрирует всю электроэнергию, проданную в сеть. Счетчик B будет регистрировать любую электроэнергию, купленную из сети. Другой способ взглянуть на это состоит в том, что счетчики A и B будут регистрировать мгновенный экспорт и импорт соответственно. В конце месяца или периода начисления неттинга.

Чтобы представить счетчик A, мы имеем:

(4) Экспорт

Уровень потребления с «Экспорт» будет рассчитан как = (-) Сумма мгновенных продаж кВтч * $ / кВтч

Чтобы представить счетчик B, мы имеем:

(5) Импорт

Уровень потребления с «Импортом» будет рассчитан как = Сумма мгновенных покупок кВтч * $ / кВтч

Ориентировочная стоимость для этих двух типов транзакций рассчитывается ежемесячно.Сравнение типов транзакций:

Ниже приведен пример различных расчетов по типу тарифа с ежемесячной оплатой:

Из таблицы видно, что расчетный счет за коммунальные услуги существенно зависит от того, какой тип операции определен.

Вы можете добавить к своему тарифу несколько сборов за потребление или электроэнергию. Нажмите кнопку «Добавить норму» в правом углу под вкладкой потребления.

Откроется всплывающее окно, как показано ниже.

Чтобы добавить норму потребления, выполните следующие действия.

Шаг 1: Введите название нормы расхода.

Шаг 2: Выберите тип ставки и соответствующий период начисления.

Как обсуждалось в начале этой статьи, для каждого типа тарифа доступны следующие периоды начисления.

Шаг 3: Укажите стоимость

а.Фиксированный тариф на электроэнергию — если это постоянный тариф на электроэнергию ($ / кВтч), введите стоимость в поле «Стоимость ($ / кВтч)

г. Многоуровневая ставка энергии — если это многоуровневая ставка энергии, установите флажок «Имеет уровни». Откроется таблица, в которой вы сможете ввести уровни и их стоимость. Введите лимиты для каждого уровня и стоимость в долларах / кВтч. Таблица на рисунке ниже имеет следующие уровни — от 0 до 50 кВтч, тариф составляет 0,5 доллара США за кВтч. Между 50-100 кВтч ставка составляет 1 доллар за кВтч. Любое потребление выше 100 кВтч будет стоить 2 доллара США за кВтч.

Таким образом, если клиент потребил 300 кВтч в расчетном периоде, то стоимость = (50 кВтч * 0,5 доллара США / кВтч) + (100 кВтч * 1 доллар США / кВтч) + (150 кВтч * 2 доллара США / кВтч) = 425 долларов США

Совет: обязательно добавьте последний уровень с действительно высоким верхним пределом, чтобы все потребление, превышающее предыдущий предел, попадало в этот уровень

Шаг 4: Укажите период

a: Если эта ставка применяется к определенному времени года, измените даты начала и окончания соответственно.Дата окончания входит в указанный период.

b: Если у этого тарифа есть время использования, установите флажок «Имеет время использования?».

Укажите временной диапазон и диапазон дней недели. Вы можете указать несколько диапазонов, нажав кнопку «Добавить время использования» при необходимости.

Шаг 5. Укажите, применяется ли эта ставка в праздничные дни

Если отмечено, эта ставка будет применяться в течение всего дня для каждого праздника, игнорируя Период и Время использования.Этот флажок следует установить только для одной нормы потребления. Если существует несколько норм потребления, включающих праздничные дни, к праздникам будет применяться только последняя.

Чтобы добавить все государственные праздники в вашем регионе, перейдите в раздел «Добавить праздники».

Вы можете импортировать цены в реальном времени, щелкнув Импорт временных рядов во всплывающем окне «Создать норму потребления».

При нажатии кнопки «Импорт таймсерий» открывается всплывающее окно с просьбой выбрать файл csv с ценами в реальном времени.После того, как вы выбрали файл, вы увидите, что всплывающее окно изменилось. Вы можете редактировать только Имя и категорию оценки.

Нормы потребления рыбы — техническая поддержка

Вашингтон сталкивается с новыми и сохраняющимися угрозами отравления загрязненными поверхностными водами и отложениями. Поскольку мы стремимся уменьшить эти угрозы, как мы должны защищать жителей, которые едят рыбу и моллюсков, из вод Вашингтона? Как мы должны защищать сообщества, которые полагаются на рыбу и моллюсков как на большую часть своего рациона?

В 2013 году мы подготовили документ технической поддержки, чтобы помочь ответить на эти вопросы.В отчете оцениваются имеющиеся данные о потреблении рыбы жителями Вашингтона. Он определяет, сколько рыбы на самом деле едят люди. Эта информация имеет решающее значение для установления стандартов, которые защищают качество поверхностных вод — и для очистки загрязненных отложений под ними.

Ресурсы пресной и соленой воды штата Вашингтон приносят людям огромную пользу. Ежегодно жители и посетители вылавливают большое количество рыбы и моллюсков в развлекательных и коммерческих целях. Многие жители едят морепродукты, собранные в водах Вашингтона. Племенные народы имеют право на лов рыбы по договору. Сбор и употребление в пищу морепродуктов играет важную роль в их культурах. Рыба и моллюски важны в культурном отношении и являются частью здорового питания.

Почему нам нужно знать о потреблении рыбы?

Стойкие химические вещества, такие как полихлорированные бифенилы (ПХБ), диоксины и ртуть, могут накапливаться в тканях рыб и наносить вред здоровью людей, потребляющих рыбу.Дети и другие уязвимые группы населения могут быть особенно уязвимыми, а также взрослые, которые едят большое количество рыбы или моллюсков. Чтобы установить стандарты качества воды и очистки отложений, которые защищают здоровье человека, нам необходимо знать, сколько рыбы едят жители Вашингтона.

Как мы узнали больше о потреблении рыбы в Вашингтоне?

В 2009 году Экология начала пересмотр норм потребления рыбы для обновления правил очистки окружающей среды.

В октябре 2011 года мы подготовили проект документа технической поддержки по потреблению рыбы.Мы получили несколько сотен комментариев и отредактировали проект на основе этих отзывов. Мы провели дополнительный анализ и собрали дополнительную информацию для поддержки второго пересмотренного документа технической поддержки.

15 января 2013 г. мы опубликовали Нормы потребления рыбы: документ технической поддержки (финальная версия 2.0) с шестью вспомогательными приложениями. Прочтите письмо от 15 января 2013 г., которое сопровождало его выпуск.

Просмотрите комментарии и ответы общественности, которые помогли сформировать этот отчет

Отчет — результат многолетней работы.Экологический персонал и технические эксперты сотрудничали с федеральными, государственными и местными агентствами; племенные правительства; гражданские и коммерческие организации; и отдельные граждане и предприятия. Все они своими комментариями и ответами помогли сформировать окончательный отчет.

Где можно узнать больше о потреблении рыбы?

Ценообразование и психология потребления

Вкратце об идее

Зачем вам нужно заботиться о том, ли ваши клиенты используют вашу продукцию? Разве не достаточно того, что они купят ? Нет, если вы хотите повторить бизнес.

Рассмотрим это противоречивое влияние цены на лояльность клиентов: когда ваши клиенты знают о стоимости вашего продукта, они, вероятно, воспользуются этим продуктом — чтобы почувствовать, что они окупили свои деньги.И чем больше они его используют, тем больше вероятность, что они купят его снова.

Например, предположим, что Мэри и Билл посещают оздоровительный клуб. Билл платит 600 долларов при регистрации; Мэри выбирает план с оплатой за 50 долларов в месяц. Кто с большей вероятностью продлит свое членство? Мэри. Каждый месяц ей напоминают о стоимости, поэтому она работает больше, чтобы окупить свои деньги. А участники, которые часто тренируются, обычно обновляются.

Но чтобы стимулировать первоначальный спрос , большинство компаний маскируют своих цен посредством предварительных покупок, сезонного членства, годовой подписки и т. Д.Ценообразование, ориентированное на спрос, имеет свои достоинства, но руководители, которые используют его исключительно , рискуют променять долгосрочное удержание клиентов на краткосрочные продажи.

Идея на практике

Вот как работают цены и потребление:

• Клиенты, использующие оплаченные продукты , как правило, покупают их снова. Потребление имеет значение для любой бизнес , который полагается на удовлетворение потребностей клиентов для получения положительных отзывов и повторных продаж. Клиенты не могут повторно покупать или хвалить продукты, которые они никогда не потребляли.

Это особенно важно для предприятий, продающих подписки или членство, где долгосрочная прибыльность зависит от удержания клиентов, поскольку привлечение клиентов обходится очень дорого. Но удержать их сложно. Уровень обновления большинства журналов составляет 60% или меньше.

• Люди склонны потреблять товары, если знают их цену. Почему? Эффект невозвратных затрат: люди ненавидят растрату безвозвратных инвестиций. Например, через две недели после того, как он заплатил 300 долларов за вступление в теннисный клуб, у мужчины заболел теннисный локоть, но он продолжал играть.

• восприятия цены покупателями определяют их вероятность потребления оплаченных товаров. Когда люди расплачиваются кредитной картой, они с меньшей вероятностью запомнят стоимость или потребят товар. В одном кинотеатре уровень неявки для клиентов с кредитными картами был в 10 раз больше для клиентов с наличными деньгами.

• Ценовая комплектация маскирует стоимость отдельного продукта, снижая вероятность его потребления. Абонементы «скрывают» стоимость каждого билета, непреднамеренно побуждая клиентов рассматривать свои билеты как бесплатные.При небольшом давлении невозвратных расходов люди не используют билеты, что снижает их вероятность покупки в следующем сезоне.

Для увеличения ценообразования, ориентированного на спрос, с помощью тактики, ориентированной на потребление:

• Практика управления доходностью. Директор театра может ожидать большего количества неявок, если доля обладателей сезонных абонементов высока. Она могла бы лучше управлять расходами, укомплектовав штат в соответствии с ожидаемыми фактическими , а не оплаченными спросом, или увеличить выручку за счет перепродажи мероприятий, на которые она ожидает много неявок.

• Пошаговые выплаты для сглаживания потребления. Путем увеличения членских взносов для более широкого использования своих помещений в течение года клубы здоровья могли бы предотвратить переполнение, увеличивая удовлетворенность клиентов.

• Психологически увязать выплаты с пособиями. Распределяя затраты на отдельные услуги в рамках совокупной платы, больничные кассы могут побуждать пациентов пользоваться оплаченными льготами. Это способствует профилактике и сокращению расходов ОПЗ.

Спросите любого руководителя, как ценовая политика влияет на спрос на продукт или услугу, и вы получите уверенный и аргументированный ответ. Спросите того же руководителя, как ценовая политика влияет на потребление — в какой степени клиенты используют продукты или услуги, за которые они заплатили, — и вы получите в лучшем случае приглушенный ответ. Мы обнаруживаем, что менеджеры редко, если вообще когда-либо, думают о потреблении, когда устанавливают цены, и это обходится дорого.

Рассмотрим этот пример. Двое друзей, Мэри и Билл, вступают в местный клуб здоровья и соглашаются на годичное членство.Билл принимает решение о годовом плане выплат — 600 долларов при регистрации. Мэри выбирает план ежемесячных выплат — 50 долларов в месяц. Кто с большей вероятностью будет заниматься спортом на регулярной основе? И кто с большей вероятностью продлит членство в следующем году?

Практически любая теория рационального выбора утверждает, что они равновероятны. В конце концов, они платят одинаковую сумму за одни и те же пособия. Но наши исследования показывают, что Мэри гораздо чаще занимается спортом в клубе, чем ее подруга. Билл почувствует необходимость окупить свои деньги в самом начале своего членства, но это стремление уменьшится, поскольку боль от его выплаты в размере 600 долларов уйдет в прошлое.Мэри, с другой стороны, будет постоянно напоминать о стоимости ее членства, потому что она вносит платежи каждый месяц. Она будет чувствовать потребность окупить свои деньги в течение года и будет тренироваться более регулярно. Эти регулярные тренировки приведут к чрезвычайно важному результату с точки зрения клуба здоровья: Мэри с гораздо большей вероятностью продлит свое членство по окончании года.

Для многих руководителей идея о том, что они должны привлекать внимание потребителей к цене, заплаченной за продукт или услугу, противоречит здравому смыслу.Компании давно стремились скрыть стоимость своих товаров и услуг, чтобы увеличить продажи. И это правильно: если компании не удастся осуществить первоначальную продажу, ей не придется беспокоиться о потреблении. Для стимулирования продаж менеджеры клубов здоровья поощряют участников получать оплату раньше; ОПЗ поощряют автоматические вычеты из заработной платы; а круизные компании объединяют небольшие конкретные расходы в единый комплексный сбор.

Однако руководители могут препятствовать потреблению, применяя такую ​​практику ценообразования.Люди с большей вероятностью будут потреблять продукт, когда знают о его стоимости — когда чувствуют себя «из своего кармана». Но общие методы ценообразования, такие как предварительные продажи, абонементы и объединение цен, служат для того, чтобы скрыть, сколько покупатель потратил на данный продукт, уменьшая вероятность того, что покупатель действительно воспользуется им. И покупатель, который не использует продукт, вряд ли купит этот продукт снова. Руководители, применяющие такую ​​тактику ценообразования, не учитывая ее влияние на потребление, могут жертвовать долгосрочным удержанием клиентов на краткосрочное увеличение продаж.

Психология потребления

Давайте подробнее рассмотрим, почему потребление важно и как цены влияют на потребление.

Более высокое потребление означает более высокие продажи.

Мы считаем, что одним из первых шагов в построении долгосрочных отношений с клиентами является их желание потреблять уже приобретенные продукты. Исследования неоднократно показывали, что степень, в которой клиенты используют платные продукты, скажем, в течение одного года, определяет, будут ли они повторять покупку в следующем году.Одно полевое исследование, например, показало, что члены оздоровительного клуба, которые тренировались четыре раза в неделю, с гораздо большей вероятностью возобновили свое членство, чем те, кто тренировался только один раз в неделю. Согласно другому исследованию, клиенты, которые регулярно пользовались улучшенной услугой кабельного телевидения в течение одного года, с большей вероятностью продлили подписку в следующем году, чем те, кто пользовался услугой лишь изредка. ¹

Степень использования покупателями оплаченных продуктов определяет, будут ли они повторять покупку.

Потребление имеет большое значение для чистой прибыли во многих отношениях. В компаниях, которые продают подписки или членство, таких как Time Warner, YMCA или Metropolitan Opera, жизненно важно удержание клиентов. Но удержать клиентов непросто: в большинстве журналов процент обновления составляет 60% или меньше, а клубы здоровья удерживают только 50% своих членов каждый год. По мере усиления конкурентного давления и роста стоимости привлечения клиентов ключом к долгосрочной прибыльности является обеспечение того, чтобы клиенты действительно использовали продукты и услуги, которые они покупают.

Потребление также помогает установить затраты на переключение. Например, в сфере программного обеспечения компании часто зарабатывают больше денег на продаже обновлений, чем на продаже первоначального приложения. Как только клиенты начинают использовать приложение, они должны либо покупать обновления, либо совершать болезненный переход на другую систему. Компании, чье программное обеспечение покупается, но никогда не используется — «готовое ПО», как его пренебрежительно называют, — упускают возможность удержать клиентов в долгосрочной перспективе.

Потребление не менее важно для предприятий, которые полагаются на поток доходов, состоящий из двух частей.Для кинотеатров, спортивных арен и концертных залов продажа билетов — лишь один из источников дохода; парковка, еда и напитки, а также продажа сувениров — второй прибыльный источник дохода. Отчет по маркетингу команды подсчитал, что посещение бейсбольной игры высшей лиги в 2000 году для семьи из четырех человек стоило 121,36 доллара. Только половина этой суммы пошла на покупку билетов; другая половина была потрачена на пиво, газированные напитки, хот-доги, программы, бейсболки и тому подобное. Очевидно, что если владельцы билетов не посещают мероприятия, эти высокоприбыльные вторичные продажи теряются.

Третьи организации считают, что их основная миссия состоит в поощрении определенных видов потребления. HMO, например, знают, что общее состояние здоровья их клиентов улучшится — и их собственные расходы будут ограничены — если пациентов можно убедить делать регулярные прививки и периодические осмотры. Но они добились ограниченного успеха в этом. По некоторым оценкам, 15% застрахованных детей не получают всех необходимых им прививок, 30% застрахованных женщин из группы риска не проходят маммографию в течение любого двухлетнего окна, а 50% застрахованных мужчин старше 50 не проходят медосмотр. в течение любого трехлетнего периода.

Наконец, потребление важно для любого бизнеса, который полагается на удовлетворение, чтобы генерировать повторные продажи и положительную молву. В отношении столь разнообразных продуктов, как вино, книги и КПК, клиенты не будут покупать снова и не рассказывать о продуктах, если они вообще не будут их использовать. В самом деле, трудно представить себе бизнес, в котором потребление не имеет значения.

Затраты привода расход.

Люди с большей вероятностью будут потреблять продукт, если они знают о его стоимости.Это известно как эффект невозвратных затрат: потребители чувствуют себя вынужденными использовать продукты, за которые они заплатили, чтобы не думать, что они потратили свои деньги зря. Хорошо задокументировано, что потребители обычно принимают во внимание невозвратные затраты при принятии решения о дальнейших действиях. В одном примере, который стал известным Ричардом Талером, поведенческим экономистом из Чикагского университета, мужчина вступает в теннисный клуб и платит членский взнос в размере 300 долларов в год. Спустя всего две недели игры у него развивается острый случай теннисного локтя. Несмотря на боль, мужчина продолжает играть, говоря: «Я не хочу зря тратить 300 долларов.”

Аналогичным образом Хэл Аркс, психолог из Университета Огайо, попросил 61 студента колледжа предположить, что они по ошибке купили билеты на лыжную прогулку за 50 и 100 долларов на одни и те же выходные. Студентам сообщили, что поездка за 50 долларов им понравится гораздо больше. Затем им сказали, что они должны выбрать между двумя поездками и позволить другому билету пропасть. Удивительно, но более половины студентов сообщили, что они отправятся в менее приятную поездку за 100 долларов. Для этих студентов более крупная невозвратная стоимость имела большее значение, чем большее удовольствие, которое они получали от менее дорогой поездки.

Ценообразование влияет на восприятие стоимости.

Наше исследование также показывает, что потребление определяется не столько фактической стоимостью оплаченного продукта, сколько его предполагаемой стоимостью. На это восприятие сильно влияет способ оценки продукта. Некоторые политики ценообразования подчеркивают предполагаемую стоимость оплаченного продукта, в то время как другие политики ценообразования маскируют стоимость.

Рассмотрим такую ​​простую вещь, как способ оплаты. Денежная транзакция на 10 долларов выглядит иначе, чем на 100 долларов.Отсчет валюты и получение сдачи позволяют покупателю осознавать масштабы сделки. Но транзакция по кредитной карте на 10 долларов во многих отношениях неотличима от транзакции на 100 долларов — в обоих случаях требуется просто подписать листок бумаги.

Тактика ценообразования, которая маскирует, а не подчеркивает цены, снижает давление на покупателей, заставляющих их использовать продукт, чтобы окупить свои деньги.

Неудивительно, что люди лучше запоминают стоимость продуктов, если платят наличными, чем при оплате кредитной картой.Кроме того, они испытывают большее давление, чтобы потреблять продукты, если они платят наличными, чем если они платят кредитной картой. В одной из исследованных нами театральных компаний уровень неявки для клиентов с кредитными картами был в десять раз выше, чем для клиентов за наличные. Другие тактики ценообразования, которые маскируют, а не подчеркивают цены, — например, абонементы, предварительные покупки и подписки — также снижают давление со стороны потребителей продукта, чтобы получить окупаемость.

Собираем части вместе

Поскольку ценообразование оказывает такое сильное влияние на потребление, менеджеры должны принимать взвешенные решения о том, когда и как взимать плату за товары и услуги.

Сроки.

Компании часто имеют большую свободу действий при выставлении счетов за товары и услуги. Некоторые компании требуют оплаты во время или почти в то время, когда продукт будет потреблен — это верно, когда вы покупаете Биг Мак или билет в кино. Другие предприятия требуют оплаты задолго до потребления. По этому принципу издавна действовали организаторы концертов и спортивные команды. Клубы здоровья и загородные клубы также взимают большие первоначальные взносы. Наконец, некоторые предприятия позволяют клиентам платить долгое время после покупки продукта.Все чаще автопроизводители и производители бытовой электроники рекламируют схемы «купи сейчас, плати потом».

Компании принимают эти решения о сроках, основываясь либо на финансовых соображениях (лучше заплатить раньше, чем позже), либо на соображениях спроса («покупай сейчас, плати потом» увеличивает потребительский спрос). Но это может быть недальновидно. Платежи, которые происходят во время потребления или незадолго до него, привлекают внимание к стоимости продукта, повышая вероятность его потребления. Напротив, платежи, произведенные задолго до или после фактической покупки, уменьшают внимание к стоимости продукта и уменьшают вероятность того, что он будет использован.

Мы провели опрос в Чикагском музее науки в 1997 году, чтобы определить, как время влияет на потребление. Мы представили 80 посетителям следующий гипотетический сценарий: «Шесть месяцев назад вы увидели рекламу театрального мероприятия и позвонили, чтобы забронировать билет на 50 долларов. Вчера вы пошли в кассу и заплатили 50 долларов наличными за билет, который не подлежит возврату. Этим утром вы проснулись с гриппом. Событие сегодня вечером. Ты пойдешь в театр или останешься дома? » Почти 60% людей заявили, что пойдут в театр.Они не хотели, чтобы те 50 долларов, которые они только что заплатили за билет, пропали даром.

Затем мы представили немного другой сценарий другой группе из 80 посетителей. Этой группе сказали, что они оплатили билет за полгода до мероприятия, а не накануне. На этот раз менее 30% опрошенных сказали нам, что пойдут в театр. Единственная разница между двумя сценариями заключалась в сроках выплаты. Тем не менее, этой разницы было достаточно, чтобы снизить прогнозируемое потребление на 50%.Результаты этого, а также нескольких аналогичных опросов показывают, что оперативность платежа может иметь решающее значение для потребления оплаченного продукта.

Фактически, потребление внимательно отслеживает сроки платежей клиентов. Мы проанализировали данные об оплате и посещаемости 200 членов престижного оздоровительного клуба в Колорадо. По контракту все участники были облечены в членство на один год, которое стоило им 600 долларов каждый. Ценовая политика клуба позволяла членам выбирать один из четырех планов оплаты: годовой, полугодовой, квартальный и ежемесячный.

Членов, сделавших разовый годовой платеж, чаще всего использовали клуб в месяцы сразу после платежа, что отражает значительный эффект невозвратных затрат. Но со временем эффект невозвратных затрат рассеялся. К последним месяцам люди, казалось, относились к своему членству так, как будто они были бесплатными, и работали со скоростью, которая составляла лишь четверть от того, что было в первые несколько месяцев. То же самое относится и к членам, которые платили раз в полгода или квартал: посещаемость была самой высокой сразу после выплаты, а затем неуклонно снижалась до следующего платежа.Это привело к пилообразной схеме использования, резкое увеличение в первый и седьмой месяцы для участников с полугодовой оплатой и каждые три месяца для участников с квартальной оплатой. Напротив, схема использования членов, которые платят ежемесячно, была более гладкой. Так как им каждый месяц напоминали о стоимости членства, они пользовались услугами по постоянной ставке (см. Выставку «Потребление следует за сроками платежей»). Сроки платежей важны, потому что они влияют на удержание клиентов клубом.Участники, которые платили ежемесячно, пользовались тренажерным залом наиболее последовательно, что делает эту схему ценообразования наиболее вероятной для продления членства.

Потребление соответствует срокам платежей. Наш анализ записей одного оздоровительного клуба показал, что потребление точно соответствует срокам платежей. Независимо от того, производили ли члены ежегодные, полугодовые или ежеквартальные платежи, использование клуба было самым высоким в месяцы сразу после платежа и неуклонно снижалось до следующего платежа. Участники, которые платили ежемесячно, пользовались тренажерным залом наиболее последовательно, что делает эту схему ценообразования наиболее вероятной для продления членства.

Ценовая комплектация.

Организации часто группируют цены, чтобы увеличить спрос на продукты и услуги. Эта практика действительно увеличивает краткосрочный спрос, но может также снизить потребление.

Несколько исследований демонстрируют эту тенденцию. Мы провели опрос в лыжном городке Колорадо, например, представив два немного разных сценария двум группам из 50 лыжников. Первой группе сказали: «В Колорадо ранняя весна, и у вас четырехдневный лыжный отпуск.В день приезда вы купили четыре однодневных лыжных билета по 40 долларов каждый. Настало утро последнего дня. У вас было три отличных дня катания на лыжах, но прошлой ночью дождь обрушился на местность, сделав беспорядок на склонах. Подруга советует не кататься на лыжах, а расслабиться и уйти пораньше, чтобы дома не было пробок ». Мы представили тот же сценарий другой группе с одним важным отличием. Мы сказали членам второй группы, что вместо того, чтобы покупать четыре однодневных билета по 40 долларов за штуку, каждый из них купил четырехдневный ски-пасс за 160 долларов.

Мы попросили членов обеих групп сообщить о своей вероятности катания на лыжах по шкале от одного до десяти, где один указал «определенно не будет кататься на лыжах», а десять — «определенно будут кататься на лыжах». Средний ответ первой группы составил 7,0, что указывает на высокую вероятность катания на лыжах на четвертый день. Средний ответ второй группы составил 3,3, что указывает на низкую вероятность катания на лыжах.

Эти два сценария были идентичны в финансовом отношении, так в чем же разница? В этом и нескольких других исследованиях мы обнаружили, что ценовое объединение значительно влияет на потребление.Проще говоря, гораздо легче идентифицировать и учитывать стоимость отдельного продукта в разукрупненной транзакции, чем в групповой транзакции. Однозначное соотношение между ценой и выгодами в разукрупненной транзакции делает стоимость этого предмета очевидной, создавая сильный эффект невозвратных затрат и высокую вероятность потребления.

Нигде влияние объединения цен на потребление не является более очевидным, чем в случае сезонных абонементов. Покупатель платит единую сумму за набор отдельных событий, что затрудняет распределение затрат на какое-либо одно выступление или игру.Это снижает вероятность его использования. Мы проверили это, проанализировав данные о покупках билетов и посещаемости летних шекспировских фестивалей. Фестиваль проходил с июня по август 1997 года и включал постановку четырех пьес. Некоторые держатели билетов купили билеты на один спектакль, некоторые — на два или три спектакля, а третьи — на все четыре спектакля. Мы обнаружили, что процент неявки людей, купивших билеты на одиночный спектакль, составлял 0,6%, что указывает на то, что явились почти все владельцы билетов.Но процент неявки для тех, кто покупал билеты на два спектакля, составлял 3,5%; за три игры — 13,1%; и за четыре игры — 21,5%. По мере того как пакет билетов увеличился с одного до четырех спектаклей, вероятность того, что человек не появится на одном из спектаклей, выросла в 35 раз.

Можно утверждать, что более высокий уровень неявки тех, кто купил билеты на несколько спектаклей, был вызван другими факторами: скукой (владельцы билетов устали от Шекспира) или, возможно, неудовлетворенностью (после первого спектакля владельцы билетов осознали, что качество выступлений было не очень).Однако когда мы посмотрели только на первый спектакль, на который каждый человек купил билеты, картина осталась прежней. По сравнению с показателем неявки в 0,6% для владельцев билетов на разовую игру, процент неявки на первую игру для тех посетителей, которые приобрели билеты на две, три и четыре игры, составлял 2,8%, 7,8% и 15,8% соответственно. Таким образом, объединение билетов в пакеты имело такой же эффект, как и предварительная продажа билетов в наших предыдущих примерах: оно скрывало стоимость каждого билета. Не имея возможности связать затраты и выгоды от какого-либо конкретного спектакля, посетители, купившие билеты на несколько спектаклей, все чаще относились к своим билетам как к бесплатным.Из-за небольшого давления невозвратных расходов многие из этих клиентов не использовали билеты, за которые они заплатили ранее, что снизило их вероятность повторения покупки билетов в следующем сезоне.

Связь цены и потребления

Мы не предлагаем руководителям отказаться от своей текущей политики ценообразования, ориентированной на спрос, и сосредоточиться исключительно на стимулировании потребления путем принятия решений о ценообразовании. Это было бы нереально и неразумно. Многим компаниям не хватает возможности (или желания) реструктурировать свою практику ценообразования.В некоторых случаях отраслевые нормы или ожидания потребителей диктуют использование предварительных продаж или группировки цен. Однако мы считаем, что руководители должны учитывать потребление при установлении цен. Вот несколько советов, как это сделать.

Практика управления доходностью.

могут управлять операциями более эффективно, предвидя фактический спрос, учитывая естественное сочетание объединенных и разделенных покупок или соотношение авансовых и текущих покупок. Рассмотрим случай директора театра.Она может прогнозировать, что процент неявки составит 20%, если доля владельцев сезонных абонементов высока, но процент неявки составит всего 5%, если доля владельцев сезонных абонементов мала. Вооружившись этими знаниями, она могла лучше управлять расходами, укомплектовывая персонал в соответствии с фактическим, а не оплачиваемым спросом. В качестве альтернативы, она могла увеличить доходы, перепродавая одни мероприятия, а не другие. Во многом так же, как авиакомпания продает больше билетов на рейс пропорционально ожидаемому количеству неявок, менеджер театра может перепродавать спектакли, где ожидается, что процент неявок будет высоким.

Пошаговые выплаты для плавного потребления.

Второй способ действий, несколько более активный, но все же в рамках существующей практики ценообразования, заключался бы в смещении циклов выставления счетов, чтобы со временем спрос сглаживался. Это еще одна форма управления урожайностью. Клубы здоровья, например, знают, что большинство их новых членов регистрируются в определенное время года, чаще всего в январе. Но многие по-прежнему предлагают скидки участникам, которые полностью платят в начале календарного года.В итоге пик использования приходится на январь, февраль и март, что снижает удовлетворенность клиентов из-за нагрузки на помещения. Клубы здоровья могут изменить циклы выставления счетов, чтобы компенсировать эту тенденцию. Например, оздоровительный клуб может предложить 10- или 14-месячные контракты, возможно, со скидкой, чтобы прервать цикл январских продлений. Со временем это изменение поможет сгладить спрос и повысить удовлетворенность клиентов.

Время выплат для максимального потребления.

Некоторые руководители могут делать больше, чем просто реагировать на спрос: они могут использовать свою ценовую политику для активного поощрения потребления. Возможно, наиболее действенный способ добиться этого — более тесно увязать выплаты с пособиями. Рассмотрим владельцев абонементов Boston Red Sox, которых просят заплатить за билеты за пять месяцев до начала сезона. Чтобы повысить посещаемость в течение сезона, руководители Red Sox могли распределить этот один крупный платеж. Они могли, скажем, выставлять счета клиентам в четыре этапа.Клиенты могут даже предпочесть этот подход, потому что небольшие платежи более удобны в финансовом отношении. Точно так же клуб здоровья, который мы изучали, мог бы увеличить посещаемость и, следовательно, удержание клиентов, продвигая годовое членство с ежемесячными, а не ежегодными платежами.

Психологически увязать выплаты с пособиями.

Некоторые компании рассматривают группировку цен как необходимый инструмент для стимулирования начальных продаж: если они устранят группировку цен, они могут отменить продажу. Однако организации могут психологически разделить эти предложения, чтобы стимулировать потребление.Один из способов сделать это — выделить цены на отдельные товары в наборе после оплаты. Например, туристические компании могут указать примерную стоимость предложений в путевках. Некоторые круизные лайнеры, работающие по системе «все включено», уже заставляют гостей платить за напитки, еду и развлечения с помощью бусинок, чтобы подчеркнуть тот факт, что на самом деле нет ничего бесплатного. Рестораны могут предлагать одни и те же блюда как по меню, так и в рамках ужина с фиксированной ценой, так что стоимость каждого блюда в последнем становится ясной.Точно так же ОПЗ могут способствовать профилактическому уходу, распределяя стоимость отдельных услуг в рамках совокупной платы, делая стоимость этих услуг более очевидной для клиента. Это повысит вероятность того, что зачисленные участники получат те льготы (прохождение обследований, прививок и т. Д.), За которые они уже заплатили.

Уменьшите расход.

Не все организации хотят постоянно поощрять потребление. Представьте себе менеджера действительно дефицитного ресурса, такого как частное поле для гольфа, прекрасным воскресным утром в июне.Главной задачей является управление пиковым спросом. Существующие альтернативы состоят в том, чтобы ограничить количество допущенных клиентов, как когда членство в загородном клубе ограничено, или принять всех клиентов и рискнуть недовольством, когда объект загружен. Первое решение ограничивает доходы; второй увеличивает разочарование клиентов. Управляя тем, когда и как производятся платежи, руководители могут максимизировать общее количество клиентов, которые платят за их услуги, и в то же время ограничить пиковый спрос. Если менеджер поля для гольфа взимает ежегодные членские взносы в январе или феврале, задолго до начала сезона игры в гольф, к наступлению пикового летнего сезона трудности с оплатой у участника исчезнут, что снизит потребность в получении выгоды.Это должно позволить клубу максимально увеличить свою членскую базу, не отвлекая участников, желающих играть в пиковый период. Напротив, если клуб выставит счет своим членам незадолго до пикового сезона, скажем, в мае или июне, он будет непреднамеренно стимулировать спрос в самое загруженное время. Точно так же, когда отдыхающие на горнолыжном курорте покупают недельные билеты на подъемник, курорт может предоставить им семь дневных билетов или пакетный проездной. Первый будет стимулировать ежедневное потребление («Я не собираюсь тратить сегодняшние билеты!»), А второй замаскирует стоимость катания на лыжах в любой день и уменьшит скопление людей на склонах.• • •

Менеджеры много времени думают о том, как заставить клиентов покупать их продукты и услуги. Но это только полдела. Если организации хотят построить долгосрочные отношения с клиентами, они должны убедиться, что их клиенты действительно используют их продукты. Первый шаг — это ценообразование.

Скорость потребления кислорода тканью, измеренная микрополярографическим методом

J Gen Physiol.1966, 1 ноября; 50 (2): 317–335.

От инженерного колледжа Калифорнийского университета в Беркли.

Нынешний адрес доктора Такахаши — Центр Роговицы, Нью-Йорк.

Abstract

Описан новый метод измерения скорости потребления кислорода листом однородной ткани. Этот метод измеряет кислородным электродом типа Кларка без мембраны время, в течение которого ткань потребляет весь растворенный в ней кислород. Электрод прикладывают к одной поверхности тканевого листа, а другая поверхность закрывается от атмосферы покровным стеклом.Потребление рассчитывается на основе оценки кислорода, растворенного в ткани в момент ее покрытия, и времени, за которое напряжение кислорода на одной поверхности упадет до нуля. Данные также дают коэффициент диффузии кислорода в ткани, потребляющей кислород.

Полный текст

Полный текст этой статьи доступен в формате PDF (918 КБ).

Избранные ссылки

Эти ссылки находятся в PubMed. Это может быть не полный список ссылок из этой статьи.

• DUANE TD. Устойчивое состояние гидратации роговицы. Am J Ophthalmol. 1949 июн; 32 (Pt 2) (6): 203–207. [PubMed] [Google Scholar]
• FATT I. УЛЬТРАМИКРОКИСЛОРОДНЫЙ ЭЛЕКТРОД. J Appl Physiol. 1964 Март; 19: 326–329. [PubMed] [Google Scholar]
• HILL RM, FATT I. ПОЛУЧЕНИЕ КИСЛОРОДА ИЗ РЕЗЕРВУАРА ОГРАНИЧЕННОГО ОБЪЕМА СОРНЕЕЙ ЧЕЛОВЕКА IN VIVO. Наука. 6 декабря 1963 г .; 142 (3597): 1295–1297. [PubMed] [Google Scholar]
• LANGHAM M. Использование кислорода составляющими слоями живой роговицы.J Physiol. 1952, август; 117 (4): 461–470. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• МОРИС DM. Строение и прозрачность роговицы. J Physiol. 1957 30 апреля; 136 (2): 263–286. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• TAKAHASHI GH, FATT I. ДИФФУЗИЯ КИСЛОРОДА В КОРНЕ. Exp Eye Res. 1965 Март, 4: 4–12. [PubMed] [Google Scholar]

Статьи из The Journal of General Physiology предоставлены здесь: The Rockefeller University Press

Двойные эмиссионные, чувствительные к кислороду наночастицы бора определяют уровень потребления кислорода клетками рака груди

1.

Введение

Скорость потребления кислорода (OCR) предоставляет количественную информацию о клеточном метаболизме и использовании кислорода. Кислород необходим для нормального функционирования тканей и непосредственно участвует в производстве аденозинтрифосфата (АТФ) благодаря своей роли в цепи переноса электронов. ¹ При раке хорошо насыщенная кислородом опухоль более поддается терапевтическому ответу, в то время как гипоксические опухоли (pO2 опухолевой ткани <10 торр) связаны с плохими терапевтическими результатами.Гипоксия развивается в результате дисбаланса поступления и потребления кислорода, и в современной клинической практике не существует стандартного метода уменьшения гипоксии при раке, хотя существует множество методов лечения (например, антиангиогенетических средств) для уменьшения гипоксии опухоли. Однако одна из возможностей облегчить проблему гипоксии - уменьшить OCR опухолевых клеток; ^{2 — 5} Secomb et al, ⁶ , используя математическую модель кровеносных сосудов опухоли, предсказали, что снижение OCR опухолевых клеток на 30% устранит гипоксию; по сравнению с увеличением доставки кислорода уменьшение OCR могло быть в 30 раз более эффективным.Чтобы использовать эту терапию, необходим надежный и точный метод измерения OCR как in vitro, , так и in vivo . Измерение OCR сложно; in vivo характеристика OCR всей опухоли включает множество факторов, которые искажают данные: существует сильная зависимость от количества клеток, потребляющих кислород, типа клеток, ⁷ наличия каких-либо митохондриальных мутаций, ^{8 — 10} относительная васкуляризация опухоли, ^{10 — 12} и дифференцированное состояние клеток (недифференцированные клетки более гликолитичны). ¹³ In vivo измерения OCR опухоли полезны для характеристики всего микросреды опухоли, но практически невозможно устранить эффекты перфузии и потребления кислорода стромальными и иммунными клетками, чтобы изолировать и измерить только OCR опухолевых клеток. ^{14 — 16}

Измерения потребления кислорода in vitro обычно выполняются с использованием анализа морского конька, который удаляет эти переменных in vivo .Анализ морского конька используется для измерения скорости дыхания митохондрий путем измерения OCR до и после добавления различных ингибиторов. ¹⁷ Главный недостаток этого анализа — отсутствие точности. ¹⁸ — система не герметична, поскольку в ней используются кислородопроницаемые материалы, а диффузия внешнего кислорода в камеру ячейки может повлиять на измерения. ^{19 , 20} Компартментные модели в некоторой степени уменьшили влияние диффузии кислорода. ²¹ Более того, из-за изначально большого количества переменных, которые влияют на OCR [условия посева, дни роста, состав среды (как для роста, так и для анализа) и концентрации митохондриальных эффекторов], сообщалось о межлабораторных различиях и уходе должны приниматься в способе представления данных. ²² Кроме того, в данных Seahorse нет пространственной информации, тогда как измерения OCR с помощью флуоресцентной микроскопии могут включать эту информацию.

В онкологии хорошо известно, что опухолевые клетки демонстрируют повышенный гликолиз и пониженную митохондриальную активность — оба фактора, влияющие на изменение потребления кислорода. ¹⁰ Важно отметить, что несколько исследований расширили эти концепции, обнаружив, что рост опухоли можно регулировать посредством модуляции OCR. ^{10 , 16 , 23} Эта модуляция может вызывать различные уровни ответа на стандартные методы лечения; однако облучение представляет особый интерес из-за чрезвычайной устойчивости гипоксических опухолей к лучевой терапии.Несколько исследований успешно модулировали митохондриальную активность, чтобы действовать как радиосенсибилизатор. ^{24 — 26} Использование этих знаний в терапевтических целях требует последовательных, повторяемых, точных измерений OCR и понимания того, как его модуляция влияет на результаты лучевой терапии.

Ратиометрические методы измерения OCR in vitro становятся все более популярными благодаря повышенному разрешению и анализу в реальном времени. ¹⁸ Это осуществляется с помощью различных механизмов, обычно с помощью косвенных измерений кислорода, проводимых с помощью датчиков, чувствительных к окислительно-восстановительному потенциалу, или путем определения количества активных форм кислорода. ^{27 — 30} Здесь мы представляем новый логометрический метод количественного определения in vitro OCR с использованием двойных эмиссионных кислородно-чувствительных наночастиц бора (BNP), которые непосредственно сообщают о концентрации кислорода. МНЧ изготавливают из конъюгатов краситель-полимер на основе дифторборона-β-дикетоната (BF2bdk). Благодаря высоким квантовым выходам, большим коэффициентам экстинкции и настраиваемым цветам излучения красители BF2bdk служат универсальными инструментами для создания изображений и оптических реагентов. ^{31 — 35} Когда красители заключены в жесткую полимерную матрицу, такую ​​как поли (молочная кислота) (PLA), присутствуют как флуоресценция, так и фосфоресценция при комнатной температуре: на флуоресценцию не влияют изменения концентрации кислорода , но фосфоресценция чувствительна к изменениям в кислороде окружающей среды из-за столкновительного тушения. ^{36 , 37} Флуоресцентное и фосфоресцентное излучение независимы, время жизни при 462 и 569 нм при N2 (g) равно 0.47 нс и 1,9 мс соответственно. Это убедительное доказательство того, что короткоживущее синее излучение является флуоресценцией из синглетно возбужденного состояния, а долгоживущее желтое излучение — это фосфоресценция, происходящая из триплетно возбужденного состояния. Кроме того, желтое излучение гасится в присутствии кислорода, тогда как синее излучение не изменяется согласно полной эмиссионной спектроскопии. Хотя между двумя функциями есть некоторое спектральное перекрытие, оно минимально. ³⁸ Эта уникальная особенность делает материалы BF2bdk полезными датчиками для логометрической визуализации.Взяв отношение флуоресценции к фосфоресценции, можно определить концентрацию кислорода в образце, контролируя эффекты неоднородности частиц, интенсивности освещения и эффективности сбора. В конъюгатах краситель-полимер химические структуры BF2bdk связаны со свойствами красителя (например, цветом излучения и диапазоном обнаружения кислорода). Например, иодидзамещенный дифторбордибензойметанполи-L-лактид или PLLA (PLA) материал [BF2dbm (I) PLA] ³² может определять уровень кислорода от 0% до 21%, в то время как динафтоилметановый краситель-полимер [BF2dnm (I) PLA] ³⁹ подходит для гипоксии (от 0% до 5%).Большинство физиологических применений будет происходить в диапазоне от 1% до 11% O2. ⁴⁰ Мы ранее продемонстрировали использование этих двух типов BNP в in vivo мышиных камерах с задним окном для измерения внутриклеточного pO2 и гипоксии опухоли в микроокружении. ^{32 , 39} Недавно краситель на основе йодзамещенного нафтилфенильного производного [BF2nbm (I) PLA] показал отличное обнаружение кислорода во всем диапазоне (от 0% до 100%) и был применен для мониторинга заживления ран. ³⁸ В дополнение к использованию гидрофобного PLA в качестве жесткой матрицы, гидрофильные полимеры, такие как поли (этиленгликоль) (PEG), также используются для создания наночастиц с улучшенной водной стабильностью. ПЭГилированные наночастицы также имеют преимущество в пассивном нацеливании на опухоль, при котором они захватываются клетками посредством эффекта ЭПР. Мы сообщили о стратегии сборки стереокомплексных ПЭГилированных наночастиц из борного красителя-PLLA-PEG и PDLA-PEG с накоплением опухоли на мышиной модели. ³⁷ В этом исследовании мы ковалентно связали борный краситель полного диапазона с PLLA-PEG и применили установленный метод ПЭГилирования для создания BNP, чувствительных к кислороду, для измерения OCR. ³⁷

Наш метод заполняет важный пробел в метаболических измерениях, потому что, хотя стандартные методы морского конька могут быть расширены с 2D монослоев клеток до ex vivo 3D тканей, они полагаются на изменение потребления кислорода ингибиторами митохондриальной функции. Предлагаемый нами метод позволяет преобразовать стандартные 2D-культуры в 3D-органы. Ранее мы использовали BNP для прямой визуализации% O2 в in vivo моделях камер с задним окном мышей, которые учитывают ограничения по глубине оптических длин волн. ^{33 , 38} Наша цель здесь состоит в том, чтобы измерить и сравнить in vitro OCR, измеренное в двух клеточных линиях рака молочной железы, E0771 и 4T07, с золотым стандартом анализа морского конька. Это первый шаг к нашей конечной цели по расширению этих измерений OCR in vivo . Для измерения OCR, BNP добавляют в клеточную среду (или любой другой экспериментальный раствор), и их фосфоресценцию и интенсивность флуоресценции измеряют с помощью спектроскопического ридера для планшетов.В нашем исследовании мы также облучали каждую клеточную линию, чтобы достичь 50% выживаемости, чтобы определить, изменился ли базальный OCR. Мы предполагаем, что (1) OCR E0771 и 4T07 могут быть количественно определены с помощью ратиометрического измерения с помощью BNP, (2) OCR, измеренные с помощью планшет-ридера, сопоставимы с золотым стандартом анализа морского конька, и (3) OCR уменьшается после введения дозы радиации, которая снижает выживаемость на 50%.

2.

Экспериментальные методы и материалы

2.1.

Материалы и методы синтеза BNP

Лактидный мономер (D-лактид) был щедрым подарком от Corbion Purac ©.L-лактид был приобретен в TCI America. Лактид дважды перекристаллизовывали из EtOAc и сушили в вакууме в течение ночи перед использованием. ПЭГ был приобретен у Sigma Aldrich (2000 Да, = ~ 1,05) и высушен азеотропной перегонкой в ​​толуоле в соответствии с ранее описанным протоколом. ⁴¹ ПЭГ хранили в атмосфере азота в перчаточном боксе перед использованием в качестве макроинициатора. Полимеры PEG-PLLA-OH (GPC: Mn = 6900 = 1,04 и h2 ЯМР = 7000) и PEG-PDLA-OH (Mn = 12500, Đ = 1,08 и h2 ЯМР = 13 800) ³⁶ и сложный эфир, 6-йод, 2-метилнафтоат ⁴² получали, как описано ранее.Спектры ЯМР h2 соответствуют литературным значениям. Растворители Ch3Cl2 и THF сушили над молекулярными ситами 3 Å, активированными при 300 ° C, переносили через канюлю и сушили второй раз над молекулярными ситами 3 Å, активированными при 300 ° C. ⁴³ Растворители хранили в сухой емкости. Все остальные химические вещества были чистыми от Sigma-Aldrich и использовались без дополнительной очистки.

Синтетические методы Спектры ЯМР h2 (600 МГц) записывали на приборе Varian VMRS 600/51 в CDCl3 или D6-DMSO.Спектры ЯМР h2 относили к остаточным сигналам для протиохлороформа (7,26 м.д.), протиоДМСО (2,50 м.д.) и протиоацетона (2,09 м.д.). В назначении ЯМР h2 ароматические положения определены для положений фенила (Ph) и нафтила (Np). Константы взаимодействия даны в герцах. Среднечисловой молекулярный вес (Mn), средневесовой молекулярный вес (Mw) и индекс полидисперсности () определяли гельпроникающей хроматографией (GPC) (THF, 25 ° C, 1 мл / мин) с использованием многоуглового лазерного светорассеяния (λ = 658 нм, 25 ° C) и определения показателя преломления (λ = 658 нм, 25 ° C).Использовали защитную колонку Polymer Laboratories 5 мкм со смешанным C-фильтром и две колонки для ГПХ, а также Wyatt Technology Corp. (интерферометрический рефрактометр Optilab REX, лазерный фотометр miniDawn TREOS) и приборы Agilent Technologies (серия 1260 HPLC) и программное обеспечение Wyatt Technology (ASTRA 6.0). для анализа. Инкрементный показатель преломления (dn / dc) определяли методом однократного впрыска, предполагая 100% извлечение массы из колонок. УФ-видимые спектры регистрировали на диодно-матричном спектрофотометре Hewlett-Packard 8452A.

На рис. 1 показаны конструкция и состав стереокомплекса наночастиц.

Рис. 1

Дизайн наночастиц и состав стереокомплексных наночастиц: (а) химическая структура полимеров BF2nbm (I) PLLA-PEG и PDLA-PEG. (б) Схематическое изображение стереокомплекса ПЭГилированных наночастиц.

2.2.

Полимерный синтез

nbm (I) OH : йодзамещенный нафтилфенильный лиганд получали, как ранее описано Jin et al, ⁴⁴ для 3-гидрокси-1- (4-гидроксифенил) -3. -фенилпроп-2-ен-1-он, за исключением того, что ароматический эфир 6-йодо, 2-метилнафтоат использовали вместо метилбензоата с получением темно-коричневого порошка; 178 мг (13%).h2 ЯМР: (600 МГц, D6-ДМСО) δ17,38 (с, 1H, енол-O H ), 10,47 (с, широкий, 1H, фенол-OH), 8,75 (с, 1H, 1-NpH) , 8,48 (с, 1H, 5-NpH) 8,18 (д, J = 12, 3-NpH), 8,08 (д, J = 12, 2H, 2, 6-PhH), 7,98 (д, J = 12, 1H , 4-NpH) 7,85 (с, широкий, 2H, 7, 8-NpH), 7,34 (с, 1H, COCHCO), 6,90 (д, J = 12, 2H, 3, 5-PhH) (рис. S2) . HRMS [ионизация электрораспылением (ESI), время пролета (TOF)] m / z вычислено для C19h22O3I: 414,9831 [M-H] +; найдено 414,9825.

BF ₂ nbm (I) OH : связующий элемент борного красителя получали, как описано ранее ³⁷ , но с nbm (I) OH, чтобы получить желтый порошок после перекристаллизации из ацетона / гексана; 45 мг (35%).1H ЯМР: (600 МГц, D6-DMSO) δ11,22 (с, широкий, 1H, фенол-OH), 8,99 (с, 1H, 1-NpH), 8,55 (с, 1H, 5-NpH), 8,33 ( м, 3H, 2, 6-Ph H , 3-NpH), 8,07 (д, J = 6, 1H, 4-NpH), 7,95 (м, 2H, 7, 8-NpH), 7,87 (с, 1H, COCHCO), 7,00 (д, J = 6, 2H, 3, 5-PhH) (рис. S3). HRMS (ESI, TOF) m / z вычислено для C19h21BO3F2I: 462,9814 [M-H] +; найдено 462,9814.

BF ₂ nbm (I) PLLA-PEG : полимер, связанный с красителем, был получен, как ранее описано Kerr et al, ³⁷ , за исключением того, что краситель, BF2nbm (I) OH, был использован вместо BF2dbmOH .В этой реакции также использовали блок-сополимер mPEG-PLLA-OH с более низкой молекулярной массой (PEG = 2000 Да и PLLA = 5000 Да), полученный, как описано ранее. ² Продукт получали в виде желтого порошка; 513 мг (76%). Mn (GPC / MALS) = 7600 (dn / dc = 0,056), = 1,05 (h2 ЯМР) = 7300; h2 ЯМР: (600 МГц, CDCl3) δ8,69 (с, 1H, 1-NpH), 8,32 (с, 1H, 5-NpH), 8,17 (д, J = 6, 2H, 2, 6-PhH), 8,09 (д, J = 12, 1H, 3-NpH), 7,85 (м, 2H, 7, 8-NpH), 7,72 (д, J = 12, 1H, 4-NpH), 7,21 (с, 1H, COCHCO ), 7,06 (д, J = 6, 2H, 3, 5-PhH), 5.17 (q, J = 6, 66H, PLLA-H), 3,62 (с, ушир., 179H, PEG-OCh3Ch3-), 3,36 (с, 3H, PEG-OCh4), 1,55 (м, ушир., 217H, PLLA- Ch4) (рис. S4).

2.3.

Изготовление наночастиц

Стереокомплексные наночастицы, как показано на рис. 1, были изготовлены, как описано ранее. ³⁷ Вкратце, чувствительный к кислороду полимер (BF2nbm (I) PLLA-PEG) (45 мг) и mPEG-PDLA (45 мг) растворяли в DMF (9 мл). Раствор ненадолго нагревали для облегчения растворения полимеров. С помощью шприцевого насоса раствор ДМФ добавляли к деионизированной (ДИ) воде (81 мл) с постоянной скоростью 1 мл / мин.Раствор фильтровали через фильтровальную бумагу Whatman, и ДМФ удаляли диализом (Select / Por; отсечка молекулярной массы от 12 до 14 кДа; химический стакан объемом 2 л заполняли деионизированной водой; воду меняли каждые 2 часа в течение 6 часов, затем давали отстояться. с ночевкой). Затем раствор наночастиц пропускали через 200-нм фильтр Whatman Anotop. Размеры и полидисперсность наночастиц анализировали с помощью динамического светорассеяния (DLS, Wyatt, DynaPro Plate Reader II), и результаты соответствовали предыдущим отчетам (рис. S5). ²⁵

2.4.

Культура клеток

Клеточную линию рака молочной железы мыши E0771 (Ch4 Biosystems, Амхерст, Нью-Йорк) культивировали в RPMI 1 × 1640 с 300 мг / л L-глутамина (Гибко Гейтерсбург, Мэриленд). Клетки 4T07 получали из Американской коллекции типовых культур и культивировали в DMEM с 4,5 г / л D-глюкозы, 584 мг / л L-глутамина и 110 мг / л пирувата натрия (Gibco Gaithersburg, Мэриленд). В обе клеточные среды добавляли 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (HI-FBS) (Gibco Gaithersburg, Мэриленд) и 1% v / v антимикотика / антибиотика (A / A) (Gibco, Gaithersburg, Maryland). ).Клетки поддерживали в увлажненном инкубаторе при 37 ° C с 5% CO2. Перед экспериментом два черных 96-луночных планшета с прозрачным дном (Greiner, Bio-One, Кремсмюнстер, Австрия) на каждую клеточную линию высевали с 4 × 104 клеток / лунку и инкубировали в течение 24 часов. Это привело к почти 100% слиянию для каждой клеточной линии во время исследования.

2,5.

Калибровка наночастиц бора

Для количественной оценки концентраций кислорода в экспериментальных условиях BNP калибровали с помощью спектрометра (SpectraMax M5, Molecular Devices, Сан-Хосе, Калифорния).Раствор 1: 5 об. / Об. BNP: деионизированная вода помещали в прозрачную кювету, и спектры измеряли для 0% O2, 5% O2, 10% O2, 15% O2, 20% O2, 50% O2 и 100% O2. Газообразный кислород смешивали с газообразным азотом для достижения этих определенных концентраций кислорода. Эти газы барботировали в тестовые растворы в течение 5 минут до сбора данных. Верх кюветы был покрыт двумя слоями Parafilm (American National Can, Menasha, Wisconsin), чтобы минимизировать диффузию кислорода в кювету с открытого конца. Контроллер массового расхода GFC (Ольборг, Оранжбург, Нью-Йорк) с датчиком кислорода (MaxO2, Ceramatec Inc., Солт-Лейк-Сити, Юта) последовательно с газовой линией использовался для изменения смеси молекулярного кислорода и азота и для обеспечения точности, соответственно. Раствор калибровали при 37 ° C. Температуру раствора измеряли с помощью термопары (модель Hh33, OMEGA Engineering, Inc., Norwalk, CT). Длина волны возбуждения 405 нм. Спектр излучения (от 450 до 600 нм) измеряли с шагом 10 нм [Рис. 2 (В)]. Эта система спектрометра также использовалась для сбора данных во время экспериментов.

Рис. 2

Процедура калибровки BNP. (a) BNP в присутствии 100% O2 (синий), комнатного воздуха (коричневый) и 100% N2 (желтый) показывают разницу в цвете при изменении эмиссии в различных средах. (б) Необработанные спектры BNP в присутствии 0%, 5%, 10%, 15%, 20%, 50% и 100% O2. Флуоресценция и фосфоресценция независимы; флуоресценция остается устойчивой при 450 нм, а фосфоресценция уменьшается с увеличением процентного содержания кислорода около 560 нм. (c) Разложив полные спектры BNP (при 5% O2) на отдельные флуоресцентные и фосфоресцентные компоненты, составляющие весь сигнал, можно принять во внимание загрязнение независимых спектров.(d) Калибровочная кривая показывает, что отношение F / P (флуоресценция к фосфоресценции) к процентному содержанию кислорода квадратично по всей кривой (от 0% до 100% O2). Поскольку наш образец будет находиться в диапазоне процентного содержания кислорода от 0% до 21%, а BNP наиболее чувствительны при низкой оксигенации, наша аппроксимация показана от 0% до ∼20% кислорода со стандартными полосами ошибок, представляющими ожидаемую ошибку, основанную на оценках прогнозов, представляющий диапазон возможных значений O2 вокруг соответствия. (e) Показаны полностью разложенные флуоресцентные и фосфоресцентные спектры.Сплошные линии представляют собой флуоресценцию (F), а пунктирные линии — фосфоресценцию (P).

В MATLAB (v R2018b, Mathworks, Natick, Massachusetts) данные спектрометра использовались для параллельного факторного анализа (функция parafac.m в N-Way Toolbox ⁴⁵ ), который вычисляет два неотрицательных компонента интенсивности, которые вносят вклад в каждый измерение длины волны. Эти два компонента — флуоресценция и фосфоресценция — наиболее четко видны на рис. 2 (C) при 0% O2. Компонентные спектры для всех процентных содержаний кислорода показаны на рис.2 (E). Разбив спектральные компоненты каждой длины волны и каждого процента O2, соотношение флуоресценции к фосфоресценции (F / P) было вычислено более точно, определив точный процент, который каждый компонент вносит в общий сигнал. Повторяя это спектральное разложение для каждой известной концентрации кислорода, можно получить калибровочную кривую и полученную квадратичную аппроксимацию [Ур. (1), рис. 2 (г)]. Эта калибровочная кривая использовалась в остальных экспериментах для расчета процента O2 из измеренного отношения F / P [Рис.2 (с)]. Было обнаружено, что квадратичное соответствие данных хорошо (R2 = 0,9985) и ожидаемая стандартная ошибка прогнозов была <0,6; таким образом, мы можем использовать прямое соотношение, показанное ниже:

Ур. (1)

2,6.

Анализ морского конька

Мы использовали ранее опубликованную работу по изучению потребления кислорода клетками 4T07 по сравнению с клетками E0771 с помощью метаболического анализа морского конька, как показано в ссылке. 17. В этом исследовании анализатор XF24 от Seahorse Biosciences использовался для измерения биоэнергетического профиля линий клеток карциномы молочной железы 4T07 и E0771, которые были помещены в культуру до слияния.Были получены измерения в реальном времени OCR, скорости внеклеточного закисления и скорости продукции протонов. Эти параметры митохондриальной функции определяли в присутствии разобщающих агентов митохондрий: олигомицина, FCCP (трифторметоксикарбонилцианидфенилгидразон, разобщитель, который разрушает АТФ, перемещая протоны через клеточные мембраны) и антимицин. Следует отметить, что эти агенты вводили последовательно через порты картриджей для анализа XF до конечных концентраций 1 мкг / мл, 1 мкМ и 10 мкМ соответственно.Добавление олигомицина, ингибитора АТФазы, показывает, что OCR связано с производством АТФ. Максимальная частота дыхания, отражаемая потреблением кислорода, определяется инъекцией FCCP, которая переносит H + через клеточную мембрану перед использованием для окислительного фосфорилирования. Наконец, добавление ротенона, который ингибирует комплекс I, останавливает митохондриальное дыхание. Исследование позволило определить исходную митохондриальную активность, OCR от продукции АТФ и максимальное дыхание.

2.7.

Экспериментальная установка для оценки BNP OCR

96-луночные черные планшеты были оснащены двенадцатью лунками для каждого экспериментального условия, шестью лунками с клетками и шестью лунками без клеток, как показано в таблице S1 (дополнительные материалы). Объем растворов МНП, покрывающих лунки, составлял 50 мкл. Объем барьера из минерального масла, который замедлял внешнюю диффузию кислорода в систему во время визуализации, составлял 100 мкл (рис. 3). Каждый раствор состоял из 20% об. / Об. BNP. Контролем для эксперимента служили четыре скважины БНП, БНП с минеральным маслом и только минеральное масло.Условия эксперимента включают следующие растворы: BNP и клеточные среды с клетками; BNP и клеточные среды без клеток; и BNP, клеточная среда и 20 мМ дитионита натрия без клеток. Последний, поглотитель кислорода, выступал в качестве положительного контроля. Все экспериментальные клеточные среды были дополнены 10% об. / Об. HI-FBS, 1% об. / Об. A / A и представляли собой среду, не содержащую фенолового красного (RPMI или DMEM) (Gibco Gaithersburg, MD).

Рис. 3

Данные диффузии и скорректированного кислорода для E0771 и 4T07: (a) Несмотря на масляный барьер, который был помещен поверх экспериментального раствора (как с ячейками, так и без), в скважины диффундирует значительный внешний кислород. .Для двух линий клеток E0771 и 4T07 мы скорректировали диффузию путем измерения% O2 с клетками и без них. (b) Разница между этими измерениями приводит к фактическому проценту O2 в растворе с ячейками. Это первый шаг в вычислении OCR.

2,8.

Облучение клеток

Рентгеновский облучатель (X-RAD 320, Precision X-Ray, North Branford, CT) использовался для части облучения каждого исследования. Во время транспортировки клетки были закрыты и оставались при температуре примерно 37 ° C через парафиновый воск.Каждую клеточную линию облучали с ее 50% -ной дозой выживания: 1,85 Гр для E0771 и 2,49 Гр для 4T07, в соответствии с анализами клоногенной выживаемости. Клетки облучали с мощностью дозы 1,96 ± 0,54 Гр / мин стандартным фильтром F1, что соответствует упрочнению алюминиевым пучком 2 мм. Напряжение было 320 кВп, а ток — 10 мА. Эти значения также приблизительно соответствуют фракционированным дозам облучения, используемым в клинической практике.

2.9.

Экспериментальная регистрация спектра

Спектры планшета измеряли, как описано выше для калибровки.Сразу после облучения лунки отсасывали и добавляли экспериментальные растворы. Во время этих экспериментов клетки постоянно поддерживали при 37 ° C. Спектры измеряли через 0, 1, 2, 4, 6 и 24 часа после облучения. Точки времени измерения округляли до ближайшего часа, а между каждым сбором клетки инкубировали и хранили в защищенной от света среде.

2.10.

Microscope Imaging

BNPs можно визуализировать в стандартном конфокальном микроскопе (Zeiss Axio Observer.Z1, Carl Zeiss Microscopy, Кембридж, Массачусетс) с добавлением системы Quad-View (QV2, Photometrics, Tucson, Arizona), которая использует серию светоделителей и полосовых фильтров для разделения света от образца на четыре квадранта обнаружения. камера (Orca Flash, Hamamatsu, 2048 × 2048 пикселей, Бриджуотер, Нью-Джерси). В измерениях BNP использовался набор фильтров, предназначенный для обнаружения света при 470, 500, 535 и 560 нм с полосой пропускания ∼30 нм (флуоресцентные фильтры Brightline, 560/25 и 500/24 ​​нм, Semrock) и ртутная лампа ( Лампа X-CITE 120, Lumen Dynamics, Миссиссога, Онтарио).Длиннопроходный флуоресцентный фильтр использовали для освещения образца возбуждающим светом с длиной волны 430 нм, в то время как флуоресценция и фосфоресценция на более высоких длинах волн пропускались через детекторную оптику. Фоновое изображение, полученное из лунки планшета с клетками, которое содержало только раствор среды, было отображено и вычтено из полученного изображения BNP в MATLAB. Изображение QV2 было выровнено, как и раньше, путем обрезки каждого изображения с индивидуальной длиной волны и последующей регистрации каждого изображения с помощью аффинного преобразования к изображению с длиной волны 500 нм.Отношение интенсивности, обнаруженной из излучения на 565 и 500 нм (F / P) BNP, вычислялось для каждого пикселя изображения. Поскольку оптика этой системы не похожа на устройство для чтения планшетов, калибровочная кривая для конкретного микроскопа была получена таким же образом, как описано в разд. 2.4. Для каждой временной точки (за исключением 24 часов после облучения) отношение F / P отображалось под микроскопом после считывания планшета. После получения среднего отношения F / P для каждого изображения данные были проанализированы таким же образом, как и спектры.

Сразу после того, как спектры были получены с помощью устройства для чтения планшетов, было получено микроскопическое изображение того же планшета, прежде чем он был помещен обратно в инкубатор.

2.11.

Спектральный анализ и расчет скорости потребления кислорода

Как ранее описано в калибровке BNP, спектральное разложение в MATLAB было выполнено для всего планшета. Исходя из этого, были получены полные спектры флуоресценции и фосфоресценции и было рассчитано соотношение F / P.Затем, используя калибровочную кривую, количественно определяли процентное содержание кислорода для каждой лунки. Контрольные группы (BNP, BNP с минеральным маслом, только минеральное масло) были измерены: BNP показали ожидаемые спектры при 21% O2, а минеральное масло не внесло какой-либо значительной флуоресценции. Было подтверждено, что BNP сообщают ожидаемые спектры в среде с низким содержанием кислорода через группу BNP + дитионит натрия, где дитионит натрия поглощает O2 внутри скважины. Остальная часть анализа относится к экспериментальной группе: BNP + клеточная среда.Нашей первой задачей было внести поправку на внешнюю диффузию [рис. 3 (а)]. Скорость диффузии воздуха в планшет определяли количественно с использованием лунок без ячеек путем расчета скорости изменения кислорода. Мы построили график зависимости этой скорости диффузии от значений кислорода (все еще используя лунки без ячеек), чтобы получить кривую и аппроксимацию, которая учитывает количество кислорода в лунке через внешнюю диффузию. Аналогичным образом, изменение содержания кислорода во времени было количественно определено в группе, содержащей клетки; диффузия была скорректирована с использованием уравнения подгонки, описанного выше [Рис.3 (б)]. Наконец, OCR был рассчитан с использованием изменения процентного содержания кислорода во времени с поправкой на эффекты диффузии [уравнение. (2)]:

Ур. (2)

2.12.

Статистический анализ

Анализ Бланда – Альтмана был проведен для сравнения анализов Seahorse и BNP. Применяли двухфакторный дисперсионный анализ (ANOVA), чтобы определить, изменило ли облучение значительно базальный OCR (по сравнению с необлученным контролем), с последующим апостериорным тестом Тьюки.Достоверным считали р <0,05.

4.

Обсуждение

4.1.

OCR, количественно оцененные с помощью BNP. Выбросы являются жизнеспособной альтернативой анализу морского конька.

BNP демонстрируют последовательность в их реакции на различную кислородную среду с течением времени. Хотя общая интенсивность может снизиться (хотя, по нашему опыту, незначительно после отслеживания BNP в течение шести месяцев), ратиометрические интенсивности остаются стабильными; однако, по нашему опыту, интенсивность BNP слабо зависит от температуры эксперимента.По этой причине в этом эксперименте мы поддерживали 37 ° C (через планшет-ридер). Эквивалентность золотого стандарта анализа морского конька (через анализ Бланда – Альтмана) и нашего метода наночастиц подчеркивает успех этого нового логометрического метода измерения OCR. Основным ограничением анализа морского конька, которое мы стремились преодолеть, является его неспособность транслироваться в более сложные системы — либо 3D-культуры, либо in vivo . Наша успешная количественная оценка OCR двух клеточных линий открывает много возможностей для будущих исследований, которые требуют динамического мониторинга OCR клеток.Кроме того, с модификациями установки оптического изображения в микроскопе станет возможным получение изображений во время измерений OCR. Оснастив мышь камерой спинного окна, введя опухолевые клетки и применив BNP, мы можем измерить pO2 через окно с помощью микроскопа, как описано в предыдущих исследованиях. ^{33 , 38} Измеряя локальные градиенты pO2 возле сосудов и комбинируя эти результаты с теоретическим моделированием с использованием известных параметров переноса кислорода и диффузии кислорода, мы можем экстраполировать локальный OCR на опухоль.Этот метод аналогичен эксперименту Dewhirst et al, ⁴⁶ , в котором они использовали кислородные электроды и вывели локальный OCR в моделях камер с задним окном крыс.

Как и другие методы измерения OCR, диффузия кислорода через проницаемые материалы была значительной, несмотря на добавление масляного барьера; однако существенные эффекты диффузии контролировались с помощью контрольных лунок (лунок без клеток). Как только мы приняли во внимание это распространение, наш метод с помощью планшет-ридера позволил получить повторяемые и надежные OCR.

Хотя BNP при использовании со считывателем планшетов являются чувствительным и объективным методом количественной оценки OCR, основным преимуществом является возможность распространить этот метод на оптическую визуализацию. С добавлением системы фильтров Quad-View и анализа MATLAB мы можем отображать и количественно определять флуоресценцию и фосфоресценцию (рис. 6). Это не только позволяет проводить анализов гетерогенности и морфологии клеток in vitro, — это единственный метод количественной оценки OCR в сфероидах опухолей, опухолевых эмболах и ex vivo , срезах живых тканей.Это заметно отличается от анализа с морским коньком, в котором для измерения OCR используются специальные микропланшеты и картриджи. Для гетерогенных образцов (на предметных стеклах или в планшетах) или сложных трехмерных моделей культур (которые требуют специальных условий выращивания и планшетов) измерения OCR с помощью микроскопа неоценимы. Для нашей системы микропланшет необходим для определения базового содержания кислорода из-за его простой калибровки BNP; оптическое изображение будет вторичным показателем для определения относительных изменений в OCR.Последнее особенно полезно, потому что OCR могут модулироваться внешними факторами, такими как гипоксические условия окружающей среды, вместо химически индуцированных митохондриальных изменений в клетках. Наконец, в этом двойном методе используется стандартная технология (считыватель планшетов и конфокальный микроскоп), применяемая в большинстве лабораторий и; за исключением BNP, нет дорогих картриджей или добавок, необходимых для базовых измерений OCR.

4.2.

Зашумленные данные микроскопа снижают чувствительность оптического распознавания символов, измеренную с помощью BNP

Наши данные особенно подвержены шуму в микроскопе с большими стандартными отклонениями; однако очевидны те же тенденции, что и в данных планшет-ридера (т.е. облученные клетки 4T07 показывают более высокий OCR, чем необлученные клетки). Одним из источников шума, который можно более строго контролировать, является глубина резкости; Хорошо известно, что количество кислорода в системе in vitro сильно зависит от глубины измерения. В неопубликованном исследовании нашей группы разница между pO2 на поверхностном уровне среды сравнивалась с pO2 на клеточном уровне с использованием микроэлектрода O2. Для всех четырех клеточных линий (Hct116, 4T1, 786-0 и R3230 Ac) pO2 на клеточном уровне было значительно ниже (p <10-6, T-тест), чем на поверхности среды. ⁴⁷ В микроскопе глубина визуализации варьируется в зависимости от того, где клетки находятся в фокусе, и в том числе от значительного фонового сигнала среды (от интенсивности на разной глубине). Согласно нашему неопубликованному исследованию, pO2 также будет неточным, если мы не будем снимать изображения на определенной глубине. Более того, анализ усредняет сигнал по всему полю зрения, а не только по ячейкам. Протокол маскирования для областей интереса (то есть ячеек), вероятно, значительно снизит неопределенность измерений.В планшет-ридере используется метод считывания снизу, который снижает этот шумовой эффект, обеспечивая более надежное измерение OCR. Используя технику освещения структуры, сигнал, записанный в точке фокуса (в ячейках), дает измерение, которое обеспечивает точную точку данных на уровне ячейки.

4.3.

OCR облученных клеточных линий показывают противоположные тенденции

Измерения OCR экспериментальных (облученных) и исходных (необлученных) клеток были согласованными.E0771 демонстрирует очень значительное снижение OCR между облученными и необлученными клетками. Интересно, что хотя обе клеточные линии были облучены с долей выживания 50%, они демонстрируют противоположные тенденции: облученные клетки E0771 демонстрируют более низкий OCR, чем необлученные клетки, тогда как облученные клетки 4T07 показывают более высокий OCR, чем необлученные клетки. Процессы, участвующие в производстве энергии, составляют большую часть потребления кислорода базовой скоростью дыхания необлученных клеток, и после облучения наблюдаемые изменения в OCR клеток E0771 могут указывать на снижение мембранного потенциала, необходимого для производства АТФ. ^{22 , 48} Наблюдаемое увеличение OCR в клетках 4T07 может быть связано с увеличением репарации ядерной ДНК; Есть несколько исследований, которые демонстрируют эти механистические корреляции в облученных раковых клетках. ^{48 — 50} В частности, для 4T07, вероятно, существует корреляция между репарацией ядерной ДНК и усилением циклин-зависимой киназы 1, киназы пируватдегидрогеназы 1 и метаболизмом глюкозы в ответ на облучение. ^{48 — 51} В исследовании Qin et al, ⁴⁸ три клеточные линии (MCF10A, HK18 и P + JB6) продемонстрировали трехкратное увеличение OCR (измерено с помощью кислорода типа Кларка). электрод) в течение 40 ч после однократного воздействия ионизирующего излучения. Это увеличение может быть результатом репарации ДНК, процесса, потребляющего АТФ. ⁴⁸ В то время как это исследование, среди прочего, ⁵⁰ показывает, что большинство линий раковых клеток демонстрируют усиление OCR после радиационного воздействия, E0771 демонстрирует иную тенденцию.Для клеток E0771 мы не наблюдаем повышенного пострадиационного воздействия на OCR. Клетки E0771 имеют более низкий базальный OCR и более высокую чувствительность к излучению, чем 4T07, оба заметных эффекта сниженного энергетического метаболизма. ⁴⁹ В этих результатах может быть ряд конкурирующих эффектов: в зависимости от доли клеток, погибших в результате апоптоза и двухцепочечных разрывов ДНК, необходимость увеличения потребления АТФ для смягчения повреждений будет меньше. Переход от анаэробного метаболизма к аэробному метаболизму также будет модулировать кислородный метаболизм в зависимости от таких факторов, как индуцируемый гипоксией фактор 1альфа и другие модуляторы метаболизма глюкозы.Это лишь некоторые из возможностей, которые объясняют данные, но ясно, что потребуется специальный эксперимент, направленный на определение основных механизмов дифференциального воздействия излучения на OCR этих двух клеточных линий.

Калькулятор потребления рыбы

Что такое норма потребления рыбы?

Норма потребления рыбы — это оценочное количество рыбы (рыб и моллюсков), съеденное за определенный период времени.Ставки часто разрабатываются на основе диеты человека или группы людей со схожими характеристиками. Его часто измеряют в граммах или унциях в день.

Почему важны нормы потребления рыбы?

Нормы потребления рыбы используются для разработки стандартов качества воды, уровней очистки загрязненных участков и других действий, которые учитывают, как диета может повлиять на здоровье человека. Самый простой способ рассчитать вашу личную норму потребления рыбы — использовать калькулятор.Использовать калькулятор просто:

1. Определите, как часто вы едите рыбу
2. Учтите размер стандартной порции рыбы, которую вы обычно едите.
3. Нажмите «Рассчитать!» и ваша личная норма потребления рыбы будет рассчитываться в граммах в день.

Обратите внимание, что этот инструмент предоставляет вам значение, предполагающее, что вы едите одинаковое количество рыбы каждую неделю в течение года. Попробуйте использовать калькулятор различными способами, чтобы учесть разницу в течение года.Обычно жители Аляски едят больше рыбы в определенное время года в зависимости от наличия свежих продуктов.

Размеры порций

ПРИМЕЧАНИЕ: Вес порции должен быть основан на количестве сырого продукта

Калькулятор потребления рыбы

Размер порции, частота потребления

Один раз в месяц Дважды в месяц Один раз в неделю Два-три в неделю От четырех до пяти в неделю Шесть порций в неделю (~ ежедневно)

Очень маленький Маленький Средний Большой

Рассчитать

Многие жители Аляски меняют потребление рыбы от сезона к сезону.Ниже приведен лишь один пример того, как могут отличаться сезонные предпочтения. Если вы хотите попробовать и оценить свой годовой итог на основе сезонных предпочтений, попробуйте следующий подход:

Теперь, когда я знаю, сколько я могу съесть, что это значит для меня?

DEC находится в процессе обновления критериев, используемых для защиты здоровья человека от некоторых токсичных химикатов, потенциально содержащихся в воде. Поскольку рыбы плавают в воде, коэффициент потребления рыбы используется, в частности, для определения степени воздействия определенных химических веществ, на которую человек может испытать свой диетический выбор.Было много споров относительно наиболее подходящего значения для использования. В 2015 году Агентство по охране окружающей среды (EPA) опубликовало национальный показатель потребления рыбы: 22 г / день для населения в целом (по стране) и 142,4 г / день для натурального потребления. Эти значения основаны на общенациональном диетическом исследовании. Это значение не отражает того, что определенные группы населения могут есть больше рыбы и других водных организмов, и не включает потребление лосося, палтуса, крабов или других морских видов.

DEC понимает, что эти значения могут не отражать потребление рыбы на Аляске.В настоящее время DEC собирает данные, чтобы пересмотреть уровень потребления рыбы на Аляске, чтобы отразить количество рыбы, которое может быть потреблено местными жителями. DEC планирует принять решение по этому вопросу и разработать проект формулировок нормотворчества в 2017 году. Для получения дополнительной информации об этом проекте посетите:
Критерии здоровья человека и стандарты качества воды

Насколько безопасна рыба, которую я ем?

DEC обеспокоена природными ресурсами Аляски и здоровьем жителей штата.Следовательно, Программа мониторинга тканей рыб (FTMP) была создана для определения наличия биоаккумулятивных загрязнителей в рыбах Аляски и отслеживания тенденций в уровнях этих загрязнителей в тканях рыб. Важные коммерческие, рекреационные и натуральные виды рыб и моллюсков анализируются на наличие следов металлов (метилртуть, общая ртуть, мышьяк, селен, медь, свинец, кадмий), а также стойких органических загрязнителей (СОЗ), таких как диоксины и фураны, хлорорганические соединения. пестициды, конгенеры ПХД, бромированные антипирены, средства личной гигиены и фармацевтические препараты.Эта программа работает для обеспечения безопасности этих ресурсов и предоставления пользователям актуальной информации для принятия обоснованных решений. Тестируются несколько видов, важных для коммерческих, спортивных и натуральных пользователей. Анализы, проведенные до сих пор, не выявили высоких уровней загрязнителей, которые вызывали бы беспокойство у большинства рыб Аляски. Эти данные были важны для обновления рекомендаций штата Аляска по потреблению рыбы в 2014 году.

Указывает на внешний сайт.

Влияние вариации онтогенетической диеты на оценки нормы потребления: морской пример